用免疫磁珠做細(xì)胞分選是高效簡(jiǎn)捷的免疫細(xì)胞及其它細(xì)胞的分離純化方法,今天,借著我們跟大家聊一下MACS(magnetic-activatedcellsorting)磁珠分選器的原理及在腫瘤研究中的應(yīng)用,希望對(duì)大家有用。
磁珠分選器原理:
MACS分選是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合,在外加磁場(chǎng)中通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在分選柱內(nèi),而無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合而沒有磁性,不在分選柱內(nèi)停留,進(jìn)而使細(xì)胞得以分離。分為有柱式分選和無柱式分選。
分選策略
(1)有柱式分選-陽性分選(磁珠標(biāo)記的細(xì)胞為目的細(xì)胞)
①磁珠標(biāo)記:樣品與磁珠孵育15min左右;
②陰性組分先行流出:孵育后的樣品過柱處理,標(biāo)記磁珠的細(xì)胞在磁場(chǎng)的作用下吸附到MACS分選柱子上,沒有被標(biāo)記的細(xì)胞(陰性組分)先行流到試管中;
③洗脫陽性組分:把MACS分選柱子從磁分選器上拿下來,這時(shí)磁珠是沒有磁力的,故洗脫獲得陽性組分,收集后用于做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
(2)有柱式分選-去除分選/陰性分選(磁珠標(biāo)記的細(xì)胞為非目的細(xì)胞)
①磁珠標(biāo)記:非目的細(xì)胞被生物素化的抗體混合物標(biāo)記,然后使用抗生素MACS微珠進(jìn)行磁性標(biāo)記;
②陽性組分先行流出:孵育后的樣品過柱處理,標(biāo)記磁珠的細(xì)胞在磁場(chǎng)的作用下吸附到MACS分選柱子上,沒有被標(biāo)記的細(xì)胞(目的細(xì)胞)先行流到試管中,收集后用于做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
(3)多重分選策略-獲得多參數(shù)細(xì)胞
一般是先“陰性分選”再“陽性分選”
(4)血磁珠分選技術(shù)
MACSxpress技術(shù)可以直接從全血中用去除分選的方法分離到目的細(xì)胞,不需要ficoll離心和裂解紅細(xì)胞。MACSxpress系統(tǒng)包括分選試劑、混勻器和分選器,其中,分選器不太一樣,具有很好的兼容性,5ml,15ml和50ml的離心管都能使用。